八角茴香含量评测报告

　　八角(I llicium verum H ook..f) 为木兰科八角属植物,又称大茴香、八角茴香、大料,是广西的特色经济林树种, 其主要产品八角是传统的香料和中药材原料。八角在广西主要分布于龙州、宁明、凭祥、百色、防城、玉林、河池、苍梧等地,其中以龙州、宁明和防城等地栽培历史悠久。

　　不同产地八角茴香草莽酸含量评测

　　随着禽流感疫情在全球的蔓延,被国际卫生组织推荐的唯一一个合成的抗H5N1亚型高致病性禽流感的特效药物磷酸奥斯米韦(商品名为达菲)供不应求,而用于合成该药品的主要原料之一莽草酸有2/3取自于八角。莽草酸为白色精细粉末, 分子式C₇H₁₀O₅,易溶于水,难溶于氯仿、苯和石油醚,旋光度为-180度,熔点为185~187度。八角作为广西重要的经济林之一,开发研究其附属经济林产品对推动林业经济发展显得尤为重要。我们采用HPLC法对广西不同产地的八角进行莽草酸含量的测定,其结果对评价和控制八角茴香的质量,以及今后建立莽草酸八角专用商品林提供栽培区划依据具有重要意义。

　　莽草酸对照品为本实验室自制,并经中科院上海药物所鉴定莽草酸纯度达99.6%。八角茴香果样品由广西林业科学研究院经济林所鉴定及提供,分别采样于南宁高峰林场的爱沙分场和界牌分场、武鸣太平镇、柳州金秀林场、融安西山林场、三江牛浪坡林场、玉林共青林场和六万林场、玉林大容山、宁明派阳山林场和苍梧林场。将样品于75度干燥12h,粉碎后备用。

　　准确吸取对照样品溶液和各样品供试液20mL,分别注入高效液相色谱仪,测定色谱峰峰面积,计算含量,结果见表1。莽草酸标准品溶液及样品溶液的HPLC色谱图见图1。

表1 2015年不同产地八角茴香中莽草酸含量

　　如图1所示,A为莽草酸标准样品溶液的HPL图谱,B为某产地的八角果样品溶液的HPLC图谱。其中A图中4.258的峰和B图中4.292的峰都是色谱所检测出莽草酸的峰,可以看出实验所设条件使莽草酸色谱峰与其他组分达到良好分离,基线较平稳。

图1 HPLC图谱

　　实验对11个产地同一品种的11个八角茴香果样品进行了测定,结果表明,样品中的莽草酸含量均在6.2%以上(各样点均为混合样平均值)。各个样点的同一品种八角茴香果中莽草酸含量存在较明显的差异。其中以武鸣太平镇样点的八角茴香样品莽草酸含量最高(11.57%),玉林六万林场的样品含量最低(6.28%),对比这两处产地的样品采摘时间,其间相隔约2个月,因此采摘时间对含量上的差异应有影响。同时还要参考其他因素的影响,如地理条件、气候条件、土壤营养状况、栽培管理水平等对含量差异的影响,但此次实验尚未包括这些因素。

　　精密度试验

　　准确吸取莽草酸对照品溶液20mL, 重复进样6次,按色谱条件测定莽草酸峰面积并计算RSD值, 结果RSD为0.64%。表明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。

　　稳定性试验

　　准确吸取同一样品溶液, 在0、2、4、6、8h各进样一次, 按色谱条件测定莽草酸峰面积并计算RSD值。结果RSD为0.61%。表明样品溶液在8h内稳定。

　　重复性试验

　　准确称取同一批样品5份,按样品溶液的制备方法及进行含量测定,并计算RSD值。结果RSD值为0.38%,重复性良好。

　　加样回收率试验

　　称取已知含量样品6份, 分别加入莽草酸标准品约8mg,然后按照样品溶液制备方法制备样品并进行含量测定, 结果见表2。其平均回收率为98.22%,RSD为1.04%,符合分析要求。

表2 加样回收率试验

　　根据本次实验可以得出的结论是,不同产地同一品种的八角茴香果实中莽草酸含量存在差异。其中含量最高的(武鸣太平镇样品含量为11.57% )和最低的(玉林六万林场样品含量为6.28%) 差异较明显,就采摘时间上对比,在八角果完全成熟前采摘测得的莽草酸含量较高。另外, 造成同一品种的八角果莽草酸含量差异的原因还可能有以下几点:海拔不同,纬度不同,栽培经营管理水平不同, 立地条件不同等。下一步研究会将采样控制在一个较短的时间段内进行,同时对各个样品产地的地理和气候条件,管理水平,土壤条件,水分光照以及不同采摘时期的样品含量差异等方面进行调查和分析,以总结出影响八角茴香果实中莽草酸含量的主要因子。

　　不同产地八角茴香中茴香脑的含量评测

　　八角茴香含有大量的挥发油, 油中的主要成分为茴香脑, 研究表明茴香脑具有明显的升高白细胞的作用。为评价和控制八角茴香的质量, 并为八角栽培、采收加工提供依据, 我们收集了广西不同产地的八角茴香, 建立了用气相色谱法对八角茴香中的主要成分茴香脑含量进行测定的方法。

　　供试品制备方法　精密称取八角茴香粉末200.0mg, 加甲醇定容至10ml,称重,超声30min,称重并补足重量, 过滤, 续滤液即为供试品液。

　　稳定性试验　精密称取八角茴香粉末(玉林六万林场样品2,过60目筛)200.3mg,按样品处理法处理,依线性关系的测定条件进样分析, 进样量1μl, 每隔1h测定一次, 连续6h, 结果表明, 供试液在6hr内是稳定的, RSD为0.62%。

　　精密度试验　精密称取八角茴香粉末(玉林六万林场样品2,过60目筛)201.3mg,按样品处理法处理, 依线性关系的测定条件进样分析,进样量1μl,重复进样5次, 用浓度求算其RSD, 茴香脑的RSD为0.69%。

　　重复性实验　精密称取八角茴香粉末(玉林六万林场样品2, 过60目筛)200.0mg5份,按样品处理法同法处理, 测定。测定平均值为8.88±0.032%(g/g),RSD为0.36%。

　　加样回收率试验　精密称取八角茴香粉末(玉林六万林场样品2, 过60目筛)200.0mg5份,分别加入12.18mg的茴香脑对照品, 用甲醇定容至10ml, 称重, 按样品处理法同法处理, 测定。平均回收率为102.31%,RSD为1.78%。

　　样品含量测定　取不同产地的八角茴香样品, 按供试品溶液制备方法制备, 按线性关系测定条件进样分析, 其测定结果见表3。

　表3 　不同产地八角茴香中茴香脑的含量

　　结论与讨论

　　不同产地八角茴香中茴香脑的含量均在4.5%以上, 其中以玉林六万林场的最高(8.88%),防城十万大山的为8.22%, 质量较优;金秀的仅为4.58%, 质量较次。

　　药典2015年版一部只对八角茴香中油的含量进行了规定, 没有对八角茴香中茴香脑的含量进行规定, 因而不能客观反映其中主要成分茴香脑的含量, 用气相色谱法测定八角中茴香脑含量的方法稳定可控, 可用于质量控制。

　　目前广西各产地八角茴香的加工方法不统一, 其中有部分地区用硫磺熏制, 从我们收集的玉林六万林场两个样品对比来看, 用硫磺熏八角可能会造成八角中茴香脑的含量下降。同时硫磺熏后残留在八角药材中的硫磺会对人体的健康产生不良影响, 建议不要用硫磺熏制加工八角。我们将继续对此进行考察研究。