枸杞子青海量大宁夏历史久 哪个产地含量更优？

　　枸杞子为茄科植物宁夏枸杞(LyciumbarbarumL.)和枸杞(L.Chinese)的干燥成熟果实, 是驰名中外的名贵中药材和保健品。在我国主要种植地区有宁夏、青海、甘肃、新疆、内蒙古和河北等, 但由于生态环境和气候等因素的影响, 枸杞的品质表现出一定差异。现代药理学研究认为, 在枸杞的化学成分中,有药理作用的主要有枸杞多糖、维生素、氨基酸、黄酮及环肽类等有机成分, 还有人体必需的微量元素锰(Mn)、锌(Zn)、铁(Fe)和硒(Se)等, 它们含量的高低是评价枸杞质量优劣的重要方面。

　　不同产地枸杞子中微量元素和黄酮含量评测

　　本实验选取了11个不同产地枸杞子, 对其微量元素Mn、Cu、Zn、Fe和Se及黄酮含量进行了分析测定, 为了解不同产地枸杞子的质量提供参考。

　　枸杞样品来源及处理，枸杞子样品取自宁夏中宁、宁夏固原原洲高羊村、宁夏同心、宁夏惠农、宁夏平罗头闸、宁夏银川南梁、宁夏银川枸杞研究所、新疆精河、宁夏贺兰山东麓、青海和河北。样品用蒸馏水反复冲洗5 ～6次后, 放入瓷坩埚, 在60～70℃恒温箱内烘干, 然后粉碎过60目筛,待用。

　　枸杞子中微量元素Mn、Cu、Zn和Fe含量的测定。样品的测定:称取干燥样品2g(精确至0.0001g), 放入100ml 三角瓶中, 加入18ml浓硝酸, 6ml高氯酸, 溶液呈棕黄色, 瓶口放上小漏斗, 室温放置过夜, 于180C电热板上加热至溶液澄清, 待大量冒白烟时取下, 冷至室温, 溶液若仍显黄色时加入1mlH₂O₂ , 再加热至溶液呈淡黄色或乳白色即可。冷却后转移至50ml容量瓶中, 1%HNO₃定容到刻度。用原子吸收分光光度计进行测定, 同时做空白实验。原子吸收分光光度计工作条件见表1。

表1 　仪器测定条件

　　标准溶液的配制:按原子吸收分光光度计测定微量元素的标准溶液的配制原则配制。依表1原子吸收分光光度计工作条件测定。

　　枸杞子中微量元素Se 含量的测定样品的测定:称取枸杞试样2g(精确至0.0001)于烧杯中, 加入25 ml 浓硝酸, 放置过夜, 次日置于电热板上低温消解片刻取下冷却后缓缓加入6ml高氯酸, 继续消解至除去残余的硝酸, 冷却后转移至25ml容量瓶中, 以6mol/L HCl定容至刻度, 摇匀后用原子荧光光谱仪测量Se含量, 同时做空白实验。原子荧光光谱仪测量程序见表2。

表2 　原子荧光光谱仪测量程序

　　标准溶液的配制:按原子荧光光谱仪测定Se标准溶液的配制原则配制。依表2原子荧光光谱仪测量程序测定。不同产地枸杞子中微量元素和黄酮含量不同产地枸杞子中微量元素Cu,Zn,Mn,Fe和Se及黄酮含量见表3。实验结果经方差分析后可以看出不同产地枸杞子中微量元素及黄酮含量差异显著(F0.05=2.18)。用SNK 法进一步进行两两均值比较检验, 同一亚组内, 含量均值无明显差异, 不同亚组间含量均值差异显著(α=0.05)。11个产地的枸杞中黄酮含量被分为7个亚组, 不同产地枸杞子中黄酮含量的趋势为:宁夏平罗头闸<河北<新疆精河<宁夏惠农<宁夏固原原洲高羊村, 宁夏贺兰山东麓, 宁夏中宁<青海, 宁夏银川枸杞研究所<宁夏同心, 宁夏银川南梁。黄酮类物质具有止咳、平喘、祛痰之功效, 并能扩张冠状动脉及降低血胆固醇。

表3 　不同产地枸杞子中微量元素和黄酮含量及方差分析(x±s,n=4)

　　11个产地的枸杞中Mn 含量被分为8个亚组,微量元素Mn 含量为:宁夏中宁<宁夏固原原洲高羊村, 宁夏惠农<宁夏银川南梁, 宁夏银川枸杞研究所<宁夏平罗头闸, 宁夏同心, 新疆精可<宁夏贺兰山东麓<河北<青海。Cu含量被分为5个亚组,Cu含量宁夏中宁, 河北, 宁夏固原原洲高羊村, 宁夏平罗头闸, 宁夏惠农, 宁夏同心<宁夏银川南梁<青海<新疆精河<宁夏银川枸杞研究所, 宁夏贺兰山东麓。Zn含量被分为7个亚组, 其含量宁夏中宁, 宁夏平罗头闸<宁夏惠农, 宁夏银川南梁<宁夏固原原洲高羊村<宁夏银川枸杞研究所<宁夏同心, 宁夏贺兰山东麓, 青海<新疆精河<河北。Fe含量被分为4个亚组, 其含量为宁夏中宁, 宁夏平罗头闸,夏固原原洲高羊村, 新疆精河<宁夏银川枸杞研究所, 河北<宁夏惠农, 青海, 宁夏银川南梁, 宁夏贺兰山东麓<宁夏同心。Se含量被分为2个亚组, 它的含量河北, 宁夏银川枸杞研究所, 宁夏同心, 宁夏惠农, 宁夏平罗头闸, 宁夏贺兰山东麓, 宁夏固原原洲高羊村, 宁夏中宁<宁夏银川南<新疆精河, 青海。

表4 　不同产地枸杞子中微量元素Zn/Cu 的比值及方差分析

　　不同产地枸杞子中Zn/Cu 的比值不同产地枸杞子中微量元素Zn/Cu的比值及方差分析见表4, 由表可知不同产地枸杞子中微量元素Zn/Cu 比值差异显著(F0.05 =2.18)。用SNK法进行两两均值比较检验(α=0.05), 不同产地枸杞子中微量元素Zn/Cu 的比值被分为4 个亚组, Zn/Cu 的比值宁夏银川枸杞研究所, 宁夏贺兰山东麓<宁夏平罗头闸, 宁夏银川南梁, 新疆精河, 宁夏中宁,青海, 宁夏惠农, 宁夏固原原洲高羊村<宁夏同心<河北。枸杞的生理、药理活性应该是枸杞多糖、维生素、氨基酸、黄酮及环肽类等有机成分协同作用的结果, 对微量元素的生理作用也不能只单看其绝对含量, 而应结合其不同元素的比例来看。据报道, 人体多种疾病血清中Zn/Cu 值较低, 了解不同地区枸杞子Zn/Cu比值, 有很大意义。

　　宁夏同心和宁夏银川南梁枸杞黄酮含量明显高于其它地区, 平均含量669.5mg/100g。由此可见,黄酮类物质可能是宁夏枸杞重要的抗氧化成分。宁夏银川南, 新疆精河和青海枸杞子中含Se较丰富, 平均含量0.143μg/g 。富硒枸杞具有提高人体免疫力、预防心血管疾病及预防各类肿瘤的作用。

　　不同产地枸杞子中维生素C含量测定

　　枸杞子中含有丰富的维生素C。维生素C可用于预防和治疗坏血病, 具有清除体内自由基增强机体抵抗力的作用。笔者采用2, 4*二硝基苯肼比色法对不同产地的枸杞子中维生素C 的含量进行了测定比较。现报道如下。

　　加样回收率的测定* 移取已知维生素C 含量的内蒙枸杞子待测液2.0mL, 分别加入维生素C 对照品溶液1.0,2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL, 按下方法测定, 计算加样平均回收率, 结果见表5。平均回收率为100.44%, RSD 为2.34%(n=5)。

表5 加样回收实验(n= 5)

　　稳定性考察* 取维生素C标准工作液(10mg*L^-1)30mL于50mL量瓶中, 用1%草酸稀释至刻度。移取2mL于具塞试管中, 按标准曲线项下操作, 每隔1h 测定1次A值。在8h内的A值分别为0.045, 0.048, 0.040, 0.045, 0.043,0.044, 0.044, 0.045, 稳定性好。

　　精密度考察，取10,6,2mg*L^{- 1}的对照品溶液各2mL, 按标准曲线项下在540nm处测定吸收度, 相同室温下平行测定3次， 计算其日内、日间的RSD%, 结果见表2。样品的含量测定*称取枸杞子粗粉15.00g, 置于50mL具塞三角瓶中, 加2%草酸20mL浸泡过夜, 用组织捣碎匀浆机匀浆。精密称取匀浆15.00g于100mL量瓶中, 加1%草酸稀释至刻度, 摇匀, 放置5h, 滤过。移取滤液10mL于具塞三角瓶中, 加1%草酸10mL, 活性炭1角匙, 10min后过滤。吸取2mL滤液于试管中, 以2mL1%草酸作空白, 以下操作按标准曲线项下操作。根据回归方程计算维生素C含量[mg*(100g)^-1] , 结果见表6。枸杞子中维生素C含量测定法有碘量法、荧光分光光度法、2,6*二氯吲哚酚法等。本文采用2, 4*二硝基苯肼比色法测定枸杞子中维生素C的含量, 具有简单易行、快速准确的特点。维生素C 是枸杞子中的重要成分之一, 实验证明, 枸杞子由于产地不同, 其维生素C的含量相差悬殊, 内蒙枸杞子中维生素C含量明显高于河北、山东、宁夏产枸杞子。

表6 样品含量测定结果(n= 3)

　　不同产地枸杞子中甜菜碱含量的评测

　　甜菜碱(betaine)作为枸杞中的一种重要成分，在体内起甲基供应体的作用，可以抗脂肪肝。

　　通过对9个样品的甜菜碱峰面积进行测定，进而计算出各样品甜菜碱含量，最高为0.5880%，最低为0.3004%，均大于0.3000%，达到《中国药典》2015版规定标准;对9个样品含量进行比较，结果显示，不同枸杞子甜菜碱含量存在差异，见表7。由表7可以看出，甘肃永登县上川镇所产枸杞子的甜菜碱含量为0.4325%，在所有供试样品中列第3位，处于较高水平; 对不同产地的枸杞子样品进行品种内对比后发现，不同产地的同一品种枸杞子，甜菜碱含量差异具有统计学意义，其中宁夏所产枸杞子除平罗县头闸镇样品外，甜菜碱含量均较高，整体处于优势地位，其中就包括最高的中宁县舟塔乡所产枸杞子，甜菜碱含量为0.5880%;此外对不同品种的枸杞子进行对比发现，品种不同甜菜碱含量差异明显，其中甘肃景泰县草窝滩乡所产“蒙杞1号”枸杞子，甜菜碱含量为0.4045%，处于中等偏上水平，而青海诺木洪农场的“柴杞”则含量较低。

表7 不同产地枸杞子甜菜碱含量比较

　　供试样品枸杞子的色谱图呈现不同程度的差异，同品种枸杞子中亦有较多色谱图相似度较差，证明产地条件对枸杞子甜菜碱色谱图的特征性有影响。9个不同枸杞子样品中甜菜碱含量有明显差异，其中同品种“宁杞1 号”枸杞甜菜碱含量从0.3004%到0.5880%不等，而部分“宁杞1号”枸杞子与“蒙杞1号、“柴杞”甜菜碱含量差异亦具有统计学意义，证明同一枸杞子品种产地不同其甜菜碱含量有差异、不同枸杞子品种间甜菜碱含量也存在不同程度的差异，产地条件与品种因素对甜菜碱含量都有影响，这与前人部分研究结论一致。

　　在进行高效液相色谱测定时，曾选用C₁₈色谱，但效果较差，分析其原因可能是由于甜菜碱为季胺型水溶性生物碱，极性较大所致，故选择NH2色谱柱，结果分离效果良好; 实验中还分别在检测波长195，210，230nm下进行色谱分析，结果在230nm下各组分色谱峰均有较大吸收。实验进一步肯定了HPLC 在测定枸杞子甜菜碱含量方面准确度高、重现性好的优势; 研究主体甘肃永登县上川镇所产枸杞子的甜菜碱含量在9个样品中处第3位，就甜菜碱这一药用成分而言品质较优，这一结果有助于日后在甘肃省秦王川地区继续开展枸杞的栽培与选育工作。

　　不同产地枸杞子中5个酚酸类成分的评测

　　有关枸杞化学成分的研究有多糖、甜菜碱、黄酮、原花青素、β-胡萝卜素、东莨菪内酯、农药残留、枸杞子中脂溶性成分以及中药处方中枸杞子的定性鉴别等。

　　取所收集的不同产地的枸杞子，按方法制备供试品溶液。按色谱条件进样测定，采用标准曲线法计算样品中原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、咖啡酸和阿魏酸的含量，结果见表8～10。在线净化——可以简化或免去后续的净化过程ASE是多组分高效萃取技术，在萃取过程中一些干扰物质有时会被一起萃取出来，这些共萃取物可能会干扰分析或损害分析仪器。在供试品溶液制备中若直接加50%甲醇水溶液提取，经HPLC分析发现色谱峰很多，枸杞子中的脂类物质对部分酚酸类化合物成分造成一定干扰，无法分离，且脂溶性成分会附着在专用的色谱柱中，对色谱柱造成一定的损害。故在用50% 甲醇水溶液提取前先加除脂溶剂石油醚，以除去大部分的脂溶性成分，减免干扰峰的出现，使各酚酸类成分与其他杂质峰分离度均大于1.5。

　　ASE提取条件的选择(1)提取溶剂: 考察了乙醇，40%、50%、60%甲醇水溶液;(2)提取温度:考察了40、50、60、70℃；(3)提取静置时间：考察5、10、15、20、30min;(4)提取循环次数: 考察了1、2、3、4次。结果表明在60℃下用50%甲醇水溶液静置提取15min，循环提取1次时提取效率最高。

　　色谱条件的选择(1) 在对流动相等条件考察时发现，等度洗脱分析时间较长，且极性相近的成分较多，对测定组分有一定的干扰，故选用梯度洗脱。不仅达到物质色谱峰的分离度要求，而且大大减短了出峰时间;(2)对不同的流动相乙腈-水、甲醇-水和甲醇-0.04%冰乙酸水溶液洗脱体系进行了考察，经分析可知甲醇-0.04%冰乙酸水溶液洗脱体系可达到分离度要求。加入一定量的冰乙酸抑制了酸的解离，使色谱峰形较佳，故选用甲醇-0.04% 冰乙酸水溶液。(3)在190～400nm波长范围内进行紫外扫描。通过对色谱图的分析，结果各酚酸类成分在280nm 附近出峰多，面积大，且各色谱峰分离度良好，故选280nm作为检测波长。

　　结果分析由实验测定结果可知：(1)所有样品中5个酚酸平均含量大体上依次为表儿茶素>原儿茶醛>儿茶素> 咖啡酸>阿魏酸，但也有特例;(2)不同产地样品中总酚酸含量大体上依次为部分青海样品>内蒙古>宁夏>甘肃> 新疆，但也有部分青海产地枸杞子中总酚酸含量较低;(3)同产地样品不同种之间总酚酸含量有所差异: 野生枸杞子依次为红果枸杞子>黄果枸杞子>黑果枸杞子，而种植枸杞子依次为黄果枸杞子>黑果枸杞子>红果枸杞子;(4)同产地不同野生和人工栽培样品中总酚酸含量不一: 青海德令哈尕海镇样品总酚酸含量人工栽培>野生，具有显著性差异; 青海都兰县诺木洪样品总酚酸含量人工栽培与野生枸杞子相当，无显著性差异。

　　有文献报道“固相萃取快速测定黑果枸杞果汁中酚酸类化合物”，该文章测定的是黑果枸杞Lycium ruthenicum Murr. 果汁中6个酚酸类成分没食子酸、原儿茶素、儿茶素、绿原酸、咖啡酸和丁香酸的含量，包括本文中的酚酸类成分儿茶素和咖啡酸，但其他成分不同。本文使用快速溶剂萃取仪(ASE350) 用50%甲醇水溶液提取出枸杞子中酚酸类成分原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、咖啡酸和阿魏酸，并采用RP-HPLC法对其进行了含量测定，扩充了枸杞子中其他酚酸类成分。结果原儿茶醛、儿茶素、表儿茶素、咖啡酸和阿魏酸的浓度分别在

　　24.05～601.2mg·L-1、4.396～109.9mg·L-1、17.06～426.6mg·L-1、0.7104～17.76mg·L-1、1.085～27.12 mg·L-1 范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6) 分别为97.4%、97.7%、98.7%、95.5%、96.3%。本方法快速、准确，重现性好，适用于枸杞子中5 个酚酸类成分的含量测定，可为枸杞的质量控制提供依据。